Tratamiento y control de las infecciones por Mycoplasma gallisepticum y Mycoplasma synoviae con Fumarato Hidrogenado de Tiamulina sola y en combinación con Doxiciclina

Introducción
Las infecciones por Mycoplasmas pueden causar grandes pérdidas en las aves, Estas tienen la característica de desencadenar una Enfermedad Respiratoria Crónica Complicada(ERCC), que puede ser resistente a los antibióticos, Sin embargo varios estudios han demostrado que el Fumarato Hidrogenado de Tiamulina (FHT), es activo contra varias especies de Mycoplasmas spp.

Biología de los Mycoplasmas spp
Los Mycoplasmas son bacterias muy pequeñas, que carecen de pared celular y se caracteriza por poseer un genoma pequeño[1], Son resistentes a los antibióticos que actúan inhibiendo la síntesis de la pared celular, Recientes trabajos de investigación sugieren que el Mycoplasma gallisepticum(MG) sobrevive por largos periodos de tiempo fuera del hospedador, en el pasado se creía que esto no era posible[2], Su genoma se caracteriza por tener un tamaño de 580 – 1,350 kb (E. Coli y la Salmonella spp tiene un tamaño alrededor de 4,000 kb), para su crecimiento requiere esteroles y una temperatura de 37 C[3].

Signos clínicos y lesiones

Tabla No 1. Comparación de las lesiones causadas por los Mycoplasmas

Efecto	Mg	Ms	Mm	Mi

Sinusitis	++	+	-	-
Neumonía	++	+/-	-	-
Aerosaculitis	++	+	+	+
Sinovitis	-	++	-	+
Artritis	-	++	-	+
Condrodistrofia	-	-	+	+
Meningitis	+	+	-	-
Diminución producción huevos	++	+/-	-	-
Mortalidad Embrionaria	+	+/-	+	+
Disminución de incubabilidad	+	+/-	+	+
Reducción del crecimiento	++	+	+	-
Reducción ganancia de peso	-	-	+	+

Kleven et al., 1998[4]
^{Clasificación de las lesiones en la leyenda: ++=Severa; +=Moderada; +/-=Media; - =Ausente}

Los signos clínicos incluyen tos, estornudos, secreción nasal, conjuntivitis, sinusitis en Pavos, Falta de apetito y crecimiento deficiente, con un leve aumento de la mortalidad. La infección en pollos adultos suele ser subclínica, pero en pavos la infección casi siempre es clínica. Las lesiones incluyen sinusitis, rinitis, conjuntivitis, traqueítis y aerosaculitis y salpingitis [5]. Las lesiones histológicas iniciales se caracterizan por la presencia de exudado superficial, edema, exudación de fibrina e infiltración de células heterofílas y linfocíticas. Los sacos de aéreos pueden ser de 8 a 10 veces más gruesos de lo normal. Múltiples focos de hipertrofia, degeneración y necrosis de células epiteliales, probablemente representan sitios de unión y colonización por Mycoplasmas. Los primeros cambios en las células epiteliales van seguidos de hiperplasia. Con el tiempo después de la infección, los linfocitos, macrófagos y células plasmáticas se infiltran de manera difusa en el tejido conectivo. Los focos de células linfoides nodulares son más frecuentes en las lesiones más antiguas. Las lesiones en etapa terminal consisten con frecuencia en nódulos linfoides dispersos en el tejido conectivo fibroso aumentado.[4-5]

Una característica de las infecciones por MG es la capacidad de interactuar sinérgicamente con otros agentes de enfermedades respiratorias (incluidas las vacunas virales) y Escherichia Coli, Unido a malas condiciones ambientales como polvo, hacinamiento y / o frío. Por lo tanto, se puede esperar que la progenie de parvadas reproductoras infectadas tenga una enfermedad respiratoria significativa, que a menudo progresa a colibacilosis(ERCC) con alta mortalidad. El tratamiento con antibióticos puede ser eficaz para controlar los signos clínicos y las lesiones, Pero no eliminará la infección. Los antibióticos son más eficaces cuando se utilizan de forma profiláctica(Metafilaxia)[4].

Imagen Nº 1. Lesiones Patológicas por Mycoplasma gallesepticum.

Tratamiento y control de las infecciones por Mycoplasma gallisepticum y Mycoplasma synoviae con Fumarato Hidrogenado de Tiamulina sola y en combinación con Doxiciclina - Image 1

^{(a) saco aéreo abdominal limpio,(b) Conjuntivitis ave de 27 días por MG, (c)Sinusitis ave de postura 23 semanas(MG), (e)aerosaculitis ++ por MG(ERCC) pollo de 28 días, (f) Fragilidad en cascara ave de postura 53 semanas por MS. Fotografías John Jairo Salazar MVZ.}

Fumarato Hidrogenado de Tiamulina (FHT)
El Fumarato Hidrogenado de Tiamulina (FTH): (14-deoxi 14 [(2-dietylaminoethyl)-mercapto-acetoxi] mutilin fumarato hidrogenado), es un derivado semisintetico de las pleuromutilinas(Pleurutus mutilis), Es un Diterpenico poli cíclico(20 carbonos) con presencia de 3 anillos hidrocarbonados, Cicloexanos, Ciclopentanos, y anillos aromático[6]

Figura Nº1. Composición química del Fumarato Hidrogenado de Tiamulina Klein, U.(2013)Pig & Poultry symposium, Novartis[7]

El FHT se comporta como una base débil de carácter lipofilica, Dichas bases aceptan protones, para la formación de cationes, en este caso el FHT se caracteriza por absorberse mejor en el tubo gastrointestinal[6].

Las Tiamulinas inhiben la síntesis proteica mediante la unión a la subunidad 50 S Ribosomal inhibiendo la translocación del Aminoacil ARNt transferasa, Causa también efectos inhibitorios en la enzima Peptidiltransferasa[8]. Su presentación es característica de un polvo cristalino blanco a blanco-amarillento.

Una de las indicaciones predominantes, para el uso del Fumarato Hidrogenado de Tiamulina es el tratamiento de las Infecciones por Mycoplasmas spp en las aves: Mycoplasma gallisepticum, Mycoplasma synoviae, Mycoplasma meliagridis, Mycoplasma iowae [9]

Farmacocinética/Farmacodinamica de la Tiamulina (PK/PD)
La correlación entre la Farmacocinética/Farmacodinamica (PK/PD) se ha convertido en una herramienta importante para lograr la terapia exitosa de FHT,

Este es clasificado principalmente como un bacteriostático.

La farmacocinética (PD) se puede definir “Que hace el cuerpo con el medicamento” esto es como lo absorbe, lo metaboliza y lo elimina, La farmacodinamica (PD) se puede definir como “Lo Que hace un medicamento a el cuerpo” esto es como interactúa con los patrones de señalización y su interacción con todo el cuerpo. El modelo PK/PD describe la potencia y exposición del microrganismo, y el efecto antimicrobial del medicamento[10].

Tabla Nº 2 .Definición de parámetros de PK/PD [10]

Índice PK/PD	Definiciones	Unidades	Referencia
	Farmacodinamica(PD)
MIC	Concentración mínima inhibitoria más baja, a la que el antibiótico inhibe el crecimiento de la bacteria	µg/ml	Mounton et al., 2005[12]
MBC	Es la concentración más baja a la que se elimina el 99.9% de las bacterias	µg/ml	Taylor et al., 1983 [13]
	Farmacocinética(PK)
AUC	Área bajo la curva de concentración en 24 horas en estado estacionario. Equivalente a una dosis de AUC 0-∞	µg/ml	Mounton et al., 2005[12]
ƒ	Prefijo de farmacocinética del índice PK/PD del a fracción libre del antibiótico
CMax	Mayor concentración de medicamento estimada en el compartimento de referencia	µg/ml	Mounton et al., 2005[12]
	Correlación PK/PD
T>MIC	% acumulado en un periodo de 24 hs. en el cual la concentración del MIC excede la condición de la farmacocinética	%	Mounton et al., 2005[12]
AUC/MIC	Área de concentración del medicamento en el tiempo/MIC		Mounton et al., 2005[12]

(PD) Farmacodinamica. La tiamulina tiene una fuerte actividad In vitro contra Mycoplasma gallisepticum , La concentración mínima inhibitoria (MIC), MIC 50 de 44 aislamientos europeo es de 0.008µg/ml, MIC 90 es de 0.0031µg/ml, y el rango del MIC es de 0.004-0.125 µg/ml [11].

Tabla Nº 3. Parámetros de farmacocinética(PK) del Fumarato Hidrogenado de tiamulina

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Figura Nº 2. Parámetros de farmacocinética (PK) para Fumarato Hidrogenado de Tiamulina. Ziv(1981).

Calculo de la Dosis Optima de tiamulina según Relación PK/PD
Para alcanzar una cura en el paciente y lograr una alta probabilidad de curación microbiológica y clínica, se requiere de una exposición adecuada de las bacterias a el agente microbiano, La expo sisón depende de la dosis aplicada y la farmacocinética en el paciente, La exposición es la función de la susceptibilidad del patógeno dada por el MIC(Concentración Mínima Inhibitoria), La práctica optima de un fármaco será utilizar una dosis que sea capaz de alcanzar el objetivo farmacodinamico para una variedad de especies bacterianas, Para diferentes antimicrobianos estos enfoques están basados en la farmacocinética de la población y el análisis de la distribución del MIC, de una dosis para tratar una infección sistémica por un patógeno.

La dosis optima del antimicrobiano está dada con AUC 0-24: MIC radio, y se puede usar la siguiente ecuación [10].

Dosis = (AUC 24/MIC)*MIC*CL
fu*F

AUC 24 = Area Bajo la Curva a las 24 horas
MIC = Concentración Mínima Inhibitoria pata eliminar el microrganismo
CL= Eliminación del Medicamento en el cuerpo del paciente
fu= Fracción libre del medicamento en el Plasma
F= Biodisponibilidad del medicamento

Dosis Optima Tiamulina Mg (AUC 24/MIC) 125/h*(MIC 90) 0.031 µg/ml*CL 2.98 l/h/kg
Biodisponibilidad 0.9 (90%)

Dosis Optima para Mycoplasma gallisepticum 12.8 mg/kg

Hannan et al.,(1997)[18] reporto la CMI para Mycoplasma synoviae de 20 aislamientos recuperados al rededor del mundo, usando la dilución en plato para calcular la concentración mínima inhibitoria, MIC 50 µg/ml 0,1 el MIC 90 µg/ml 0,25 y el rango estuvo MIC 0,05-0,5 para la Tiamulina, con base aplicamos la fórmula para calcular la dosis óptima para M. Synoviae.

Dosis Optima Tiamulina Ms (AUC 24/MIC) 125*(MIC 90) 0,05 µg/ml*CL 2.98 l/h/kg
Biodisponibilidad 0.9 (90%)

Dosis Optima para Mycoplasma synoviae 20,69 mg/kg

Figura Nº 3. Farmacodinamica de la tiamulina a 20mg/k

^{MG: Mycoplasma galllisepticum, MS: Mycoplasma synoviae [19]}

Como se puede observar en la figura No 3, los patrones de susceptibilidad a 20mg/kg, Ziv et al., 1980[16] para Mycoplasma gallisepticum y Mycoplasma synoviae elimina casi la totalidad de microrganismos al obtenerse una concentración plasmática de la tiamulina de 0,78 µg/ml.

La anterior estrategia ha sido usada en los programas de tratamiento en reproductoras pesadas, para evitar la transmisión vertical al pollito bebe que va dirigido a zonas de alto desafío contra los dos Mycoplasmas[19].

Figura Nº 4. Efecto de la dosis de la Tiamulina contra MG por 3 días via agua de bebida.

^{MG. Mycoplasma gallisepticum , MIC usado para este estudio fue 0.0039 µg/ml [14]}

En la figura Nº 4. La tiamulina a 10 mg/kg de peso corporal, Elimina entre el 90 y 100% del Mycoplasmas gallisepticum, El MIC 90 que se usó para este estudio fue de 0.0039 µg/ml.

El punto es el beneficio de un tratamiento Metafilactico para el MG con Fumarato Hidrogenado de Tiamulina, Este trabajo demuestra que una forma de lograr esa efectividad es aplicar el concepto de la correlación PK/PD, Que Establece el MIC, El cual define la dosis que se debe usar para eliminar la bacteria según la vía de administración.

Xiao et al., 2016[17], en su trabajo denominado Farmacocinética/Farmacodinamica Perfiles de tiamulina frente a una infección experimental intratraqueal de Mycoplasma gallisepticum, toma en cuenta en este modelo el bloqueo de la inmunidad celular de las aves usando ciclofosfamida, Con el objetivo de ver la capacidad de eliminación del MG sin que intervega la Inmunidad, dicho modelo implica usar la dosis adecuada de tiamulina utilizando como base la ecuación de dosis optima[10], que debe tener un estudio de MIC, la cual determinara en esta correlación(PK/PD) la tiamulina exacta para producir eliminación del MG, Los Principales parámetros fueron los siguientes Cmax 2.05, 8.8, y 14 µg/ml par 5, 40, 80 mg/k vía IM(Intramuscular), lo sobresaliente de estas tres diferentes dosis es que se observó un segundo pico entre 8-12 horas post aplicación, Con base en lo anterior se puede decir la la tiamulina tiene un comportamiento dosis dependiente, Este comportamiento se debe principalmente a que la tiamulina es un metabolito que se acumula vía hígado, se ha especulado que de acuerdo a la estructura química que es altamente liposoluble causa una recirculación entero hepática, que posiblemente es la razón del segundo pico 12 horas después[17-20].

Figura Nº 5. Parámetros de farmacocinética de la tiamulina vía IM.

^{(a) Plot de Regresión lineal entre dosis y AUC[17] (b) Conteo de M gallisepticum después de aplicar tiamulina}

Es muy importante aclarar que se observa una correlación significativa entre la dosis aplicada(mg/k) vs el AUC 24h(µg/ml), (R?= 0.999), en el cual se observa una correlación lineal positiva que se interpreta que a medida que se aumenta la dosis de la tiamulina se aumenta el AUC (Fig. 5(a)), Aplicando esta proporcionalidad a la ecuación de regresión lineal y tomando el intervalo de referencia de la dosis para el tratamiento de la Mycoplasmosis aviar(12,5-25 mg/kg)[9] con un MIC de 0,25 µg/ml, El resultado es que para 12,2 mg/g el Cmax es de 2,6234 µg/ml, y para 25mg/kg el Cmax es 5,4847 µg/ml, analizando lo anterior ambas dosis superan el MIC de 0.25 µg/ml necesario para eliminar el Mycoplasma gallisepticum.

En la Figura 5(b) se puede observar una disminución brusca de la carga logarítmica (log 10) a partir de la dosis de 10 hasta 50mg/kg de 6.5 log 10 hasta 4.2 log 10.

Es de interés profesional contrastar la vía de aplicación, que nos conduce a aclarar la biodisponibilidad del Fumarato hidrogenado de Tiamulina, en tal caso al comparar las mismas dosis pero diferentes vías obtenemos.

Tabla Nº 4 . Contrastación de la tiamulina a las mismas dosis por vía agua de bebida o aplicación Intramuscular y alimento premix en las aves.

Autor (año)	Dosis(mg/kg)	Vía	Cmax(µg/ml)	MIC(µg/ml)
Ziv (1981)	12.5	Agua	0.5	0.25
Ziv (1981)	25	Agua	1.4	0.25
Xiao (2016)	12.5	IM	2.62	0.25
Xiao (2016)	25	IM	5.48	0.25
Burch (1982)	20	Alimento	1.7	0.25

Cmax: Concentración máxima lograda por el antibiótico, MIC: Concentración mínima inhibitoria necesaria para eliminar el 90% de la cepas de Mycoplasma gallisepticum referenciadas para este trabajo de investigación.

Doxiciclina Hiclato
La Doxiciclina (œ-6-deoxy-5-hidroxitetraciclina), es la segunda generación de las tetraciclinas, Posee una alta liposolubilidad relativa (5- 10 en relación con otras tetraciclinas), el cual logra una absorción activa compensada con una alta unión a las proteínas plasmáticas[21], Principalmente es activa contra bacterias Gram positiva y Gram negativas aeróbicas y anaeróbicas, Spirochetas, Mycoplasmas spp, Riketsias, Cladmmydia tracomatis, Ureoplasmas [22].

La Doxiciclina aunque tiene estudios de farmacocinética en las aves domésticas el uso es recomendado para tratamiento de las enfermedades infecciosas tales como: Colibacilosis, Salmonelosis, Staphylococcosis, Mycoplasmosis, Clamidiosis [23].Son agentes bacteriostáticos, se postula que su mecanismo de acción sean los siguientes: Quelacion activa de cationes intracelulares, Inhibición de sistemas enzimáticos, y Supresión de la síntesis proteica por unión de la doxiciclina a las subunidades ribosomales bacterianas 30S y 50S, bloqueando la unión del ácido ribonucleico aminoacil transportador (RNAt) al sitio del receptor sobre el complejo ribosómico del ácido ribonucleico mensajero(RNAm), con esto se evita la polimerización de las cadenas peptídicas, Bloqueando la síntesis de proteínas bacteriana[24].

Imagen Nº 2 Lesiones por Salmonelosis y Mycoplasmosis.

^{(a) Ovo peritonitis(Salmonella gallinarum) (b) Ápice fracturados por Mycoplasma synoviae}

Tabla Nº 4 Farmacocinética/Farmacodinamica de la Doxiciclina (PK/PD)

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Figura Nº 6. Farmacocinética de Doxiciclina en las aves Anadon et al.,1.994[25]

Anadon et al.,1994, reporta en este trabajo de investigación la concentración (µg/ml) en diferentes órganos del cuerpo del ave a las 12 horas post administración del antibiótico vía agua de bebida: En Pulmones 2,54 (µg/ml) Hígado 1,93 (µg/ml) y Riñones 3,0(µg/ml).

La farmacocinética de la Doxiciclina en el plasma de las aves está caracterizada por una fase de rápida distribución inicial, seguida por una eliminación lenta [25], Y el menor valor del volumen de distribución, se puede atribuir a que la Doxiciclina presenta una fuerte unión a las proteínas plasmáticas, así como una menor reabsorción intestinal en las aves [27].

El tiempo de eliminación media (t ½ ß ), de la Doxiciclina a dosis de 20mg/k vía agua de bebida reporto 6.03h (6.03*10=60.3 horas o 2.5 días) es mayor que la mayoría de las Tetraciclinas[25].

Para considerar el efecto terapéutico de la Doxiciclina Anadon et al.,1994 reporto la concentración plasmática máxima a una dosis de 20mg/k vía oral de 54.58 µg/ml en las aves, y dicha concentración plasmática a las 12 horas fue de 5.29+/- 0.30 µg/ml, teniendo en cuenta lo anterior Riond y Rivere et al., 1988[28] investigaron en las aves in vitro las concentraciones mínimas inhibitorias para bacterias Gram-positivas y Gram-negativas, El MIC aproximado estuvo entre 0.5 y 4 µg/ml lo que nos lleva a concluir que es un antibiótico que se puede usar en el tratamiento de las enfermedades de las aves sensibles a la Doxiciclina.

La concentración mínima inhibitoria(MIC) de la Doxiciclina para Mycoplasma gallisepticum de la cepa S6 fue 0,125 µg/ml, probado para tres inóculos (5log 10, 6 log 10, 7 log 10) CFU/ml o unidades formadoras de colonias por ml [26]

En los trabaos de investigación recientes publicadaos para lograr el efecto Mycoplasmicida de la Doxiciclina (Eliminación del crecimiento bacteriano), Zhang et al.,2016[26], Correlaciono la interacción PK/PD frente al MIC contra Mycoplasma gallisepticum, demostró que el antibiótico tiene un comportamiento Tiempo-dependiente que arrojo un Tmax de 0.11h, lo anterior está basado en el parámetro de %T>MIC (R2 = 0,986)(Cuando el coeficiente de correlación está cerca de 1 la relación entre las dos variables Concentración de doxiciclina vs eliminación del MG, es muy fuerte)[26].

Con respecto a la Vida media de eliminación plasmática T ½ B, que se debe multiplicar por 10 , Arroja el tiempo en que el antibiótico se elimina el 99.99% del organismo, Este trabajo reporto un T ½ B de 6.551 a las 12 horas, que nos lleva a concluir que la doxiciclina aplicada vía intravenosa se mantiene por 65.51 horas en el plasma de las aves, En base a lo anterior se reporta que al dosificar mínimo con una dosis de 32 MIC o sea 0,125 µg/ml(Doxiciclina) * 32(MIC) = 4 µg/ml de concentración sérica del antibiótico se puede generar generar una actividad Mycoplasmicida de 5.62 log 10 CFU/ml(100.000 CFU/ml) a las 48 horas (Ver figura No.7)[26], Según los reporte de Anadón et al., en 1994 la concentración de Doxiciclina después de 12 horas es de 8 µg/ml(Ver figura No 6).

Figura Nº 7 Actividad Mycoplasmicida de la Doxiciclina a o.125 µg/ml, a diferentes concentraciones del MIC. Tomado de Zhang et al.,2016

Zhang et al.,2016 reporta 64 MIC para eliminar el MG (Ver figura No.7), o sea (0.125 µg/ml doxiciclina* 64 MIC = 8 µg/ml) Según el reporte de Anadón et al.,1994 el Cmax es de 54.58 µg/ml a una dosis oral(Agua de bebida) de 20mg/k, siendo esta dosis muy superior y óptima para eliminar el Mycoplasma gallisepticum.

Modelo de correlación PK/PD de la dosis adecuada(AUC/MIC) para eliminar el Mycoplasma gallisepticum con mezcla de Fumarato Hidrogenado de Tiamulina, Y Doxiciclina, En agua de bebida, Para generar una fuerte sinergia

Es común aplicar de manera metafilactica un antibacteriano, Para evitar la ERCC (Enfermedad respiratoria Cronica Complicada), Causada por Mycoplasma gallisepticum, para esto es necesario aplicar la dosis terapéutica adecuada(Agua de bebida), que logre las concentraciones plasmáticas y tisulares necearías para lograr un afecto Micoplasmicida.

La AUC (el Área bajo la Curva), Representa la concentración-tiempo, que es proporcional a la exposición sistémica del fármaco, la cual es calculada por medio de un método trapezoidal, con extrapolación a un tiempo infinito, es de gran importancia cuando se compara con las AUC de medicamentos análogos[24].

El MIC (Concentración Mínima Inhibitoria) representa la medida de evaluación de farmacodinamica más elemental para evaluar la potencia de un antibacteriano, y no representa el curso del efecto del fármaco sobre el cuerpo, y si la tasa de cambio en el mismo puede alterar la efectividad del mismo[29].

AUC/MIC Expresa la magnitud del medicamento que queda libre en el plasma por un periodo de 24 horas, correlacionado con el MIC (Concentración Mínima Inhibitoria), Lo que mide es la eficacia antibiótica en el tiempo[29], esta métrica ofrece la magnitud (dosis adecuada), Y la frecuencia para lograr un efecto bactericida[29].

En general el datos recientes sugieren que valores altos de AUC/MIC, durante las primeras 48 horas de tratamiento están asociados con cura clínica, Siendo necesario para algunos antibióticos valores aproximados AUC/MIC > 300[29]. Como ejemplo de este índice la ciprofloxacina que tiene un efecto contra los Mycoplasmas requiere un AUC/MIC > 250 [29].

Según Burch et al.,2004 y Anadon et al., 1994, Correlacionamos las variables farmacocinéticas y farmacodinamicas para calcular el AUC/MIC(µg/ml-hr).

Tabla No. 5 Correlación PK/PD del Fumarato Hidrogenado de Tiamulina y Doxiciclina en las Aves , Via agua de bebida.

Correlación PK/PD	Tiamulina(FHT) Agua 25 mg/k	Doxiciclina Agua 20 mg/k
AUC (µg/ml-hr)	13.72	214.21
MIC (µg/ml)	0.039	0.125
AUC/MIC(µg/ml-hr)	351	1713
^{AUC= Área bajo la curva, MIC= Concentración Mínima inhibitoria, AUC/MIC= Área bajo la curva /concentración mínima inhibitoria.} ^{AUC Doxiciclina, Fumarato Hidrogenado de Tiamulina en Aves-Agua}

Figura Nº 7 Parámetros de Farmacocinética/Farmacodinamica para la mezcla de Fumarato Hidrogenado de Tiamulina y Doxiciclina frente a las cepas de referencia S6 de Mycoplasma gallisepticum.

Discusión

Cuando usamos un tratamiento metafilactico, lo que logramos es una prevención precoz de las infecciones por Mycoplasmas, Antes de que se causen daños importantes en el sistema respiratorio de las aves, Este concepto es de vital importancia para que las aves respondan a un posible tratamiento antibiótico, Este fundamento está demostrado en la capacidad que tienen los Mycoplasmas de producir inmunosupresión.

Szathmary. S., 2006[31] Definió en su trabajo de investigación porque los Mycoplasmas spp producían inmunosupresión : “Inmunología de las infecciones por Mycoplasmas y su influencia en la respuesta inmune contra infecciones virales y otras Co-infecciones”, Concluye que La interacción de los lípidos de Mycoplasmas con los TLR2 induce la producción del IL-10, activada por los Linfocitos T reguladores, que de este modo bloquea la producción de IL-12, Bloqueando la respuesta inmune celular, especialmente contra bacterias (Escherichia coli), Por lo tanto inferimos que al hacer un tratamiento metafilactico con Tiamulina+Doxiciclina, Evitamos el inbalance de la repuesta inmune en las aves.

Si no realizamos un tratamiento metafilactico, es posible que se instale una infección y que la cura bacteriológica no se dé, Y que el Mycoplasma superviviente se comporte como una “Ventana” de presión selectiva[32] y se estimule a desarrollar resistencia, Afortunadamente este suele ser un proceso lento porque los Mycoplasma tiene un Proceso de crecimiento RELATIVAMENTE lento[32].

En general el Fumarato Hidrogenado de Tiamulina es un antibiótico antimicoplasmico altamente eficaz y puede causar curación o eliminación bacteriológica completa, efecto similar a los antibacterianos bactericidas cuando se alcanzan niveles plasmáticos superiores al MIC , Especialmente en las etapas iniciales de la infección, como lo demuestra Ziv et al., 1980 [16], y demostrado en su alta capacidad de eliminación aplicando la correlación PK/PD, AUC/MIC µg/ml-hr de 3517(Ver Tabla 5 y Figura 7).

Anadon et al.,2007 [25] Concluyo que la Doxiciclina tiene un efecto Mycoplasmicida y es efectiva para el tratamiento de las infecciones en las aves, se reportó que posee una buena absorción y logra altas concentraciones terapéuticas cuando se adminstra a 20mg/k, la correlación PK/PD, AUC/MIC µg/ml-hr es de 1713, haciéndolo altamente eficiente en la eliminación bacteriana que según la norma para lograr este efecto el AUC/MIC debe ser mayor a 300, además la Doxiciclina es altamente lipofilica lo que la hace altamente absorbible a nivel intestinal para ser distribuida en los órganos de las aves[25].

Como se puede observar en la figura No. 7, Al hacer correlación de Tiamulina a 25mg/k + Doxiciclina a 20mg/ , Se logra un PK/PD muy fuerte como lo demuestran los AUC/MIC, Las cuales son muy superiores para eliminar al Mycoplasma gallisepticum y al Mycoplasma synoviae. En la mezcla de los dos antibióticos se puede lograr una POTENTE sinergia, como lo demuestra Valks. M., 2006 [33].(Trabajo no publicado), Al mezclar Tiamulina + Oxitetraciclina disminuyo la mortalidad por E.coli en 10%, cuando mezclo Tiamulina 66ppm/Oxitetraciclina 200pp (Ver tabla No. 6).

Tabla No 6. Estudio de infección artificial contra Mycoplasma gallisepticum , y respuesta de la Mezcla de Tiamulina + Doxiciclina en aves[33].

Grupo Tratado (ppm)	Mortalidad (%)	Nº Aves en que se aisló E.Coli de hígado
Testigo no Tratado	10(33.0)	8
FHT	6 (20)	5
Doxiciclina 50 ppm	7 (23.3)	6
FHT 33/OTC 100	5 (16.7)	3
FTH 66/OTC 200	3 (10.0)	2
^{FTH: Fumarato Hidrogenado de Tiamulina, Doxiciclina, ppm: partes por millón.}

Para determinar la propiedades farmacodinamicas de un antibiótico, usamos el MIC como metodo de referencia [34], El metodo de análisis para lograr la curva de eliminación bacteriana se deben fundamentar en la literatura científica publicada, Este punto es fundamental para unir la dosis derivada de los estudios preclínicos de PK/PD en las aves, con el uso del MIC para pruebas de sensibilidad antimicrobiana, el diagnóstico y la resistencia de las bacterias[35-36], Por lo tanto se recomienda establecer parámetros farmacocinéticas con la fracción libre en el plasma sanguíneo, ya que esta suele ser proporcional al líquido intersticial que rodea a los patógenos[37].

Es necesario en los antimicoplasmicos establecer los Índices de PK/PD, que incluyen el AUC (área bajo la curva) desde el tiempo 0 hasta las 24 horas, Cmax (Pico máximo de la concentración plasmática, T>MIC (Porcentaje acumulado en un periodo de 24 horas, en el cual la concentración del MIC excede la condición de la farmacocinética para eliminar al mínimo el Mycoplasma spp), AUC 0-24 :MIC (radio área bajo la curva en un periodo de 0-24 horas en relación a el MIC)[38].

En Conclusión los Antibióticos Fumarato Hidrogenado de Tiamulina, y la Doxiciclina tiene un comportamiento concentración dependiente, lo que define que su efecto micoplasmicida depende de la concentración del mismo [16], reportando Cmax en el agua de bebida para FTH A 25mg/k de 1.86 µg/ml para un MIC de MG 0.0031(1.86 /0.031= 60 veces el MIC)[16], Para la Doxiciclina el Cmax en el agua de bebida para FTH A 20mg/k es 52.54 µg/ml, para un MIC de 0.031(52.54/0.031 = 1694 veces el MIC)[25], La mezcla en el agua de bebida según las referencia es altamente micoplasmicida, que por su alta potencia no generaría una ventana de resistencia[10], Contra los Ureoplasmas (Mycoplasmas spp) en las aves.

Conflicto de intereses: Los autores declaran que no se presenta conflicto de intereses respecto a esta investigación.