INTRODUCCIÓN

La línea CLOSTAT^TM se desarrolló como una alternativa a los antibióticos promotores del crecimiento utilizados en la alimentación animal. Bacillus subtilis PB6 está presente en los productos de la línea, que inhibe Clostridium perfringens en estudios in vitro y in vivo¹. CLOSTAT^TM Dry se administra a aves y cerdos a través del pienso, mientras que CLOSTAT^TM  SP Dry se desarrolló para agregarse al agua potable como una vía alternativa de administración. Por tanto, CLOSTAT^TM tiene versiones para ser administradas a aves y cerdos vía pienso, además de añadirse al agua de bebida como vía alternativa de administración.

El presente trabajo busca verificar la compatibilidad de Bacillus subtilis PB6 con los ácidos orgánicos más comunes utilizados en la acidificación del agua, como Sal CURB® líquido (a base de formaldehído), Sal CURB® K2 líquido (a base de ácidos orgánicos) y el ácido fórmico.

Primero, el agua utilizada en el estudio se esterilizó en autoclave (15 minutos, 121°C) para eliminar las bacterias existentes. Después de enfriar, se añadieron Sal CURB® líquido y Sal CURB® K2 líquido a los matraces estériles a los niveles de inclusión recomendados de 20% (v/v) y 5% (v/v), respectivamente. El efecto del ácido fórmico solo se evaluó en dos niveles de inclusión: ácido fórmico al 2,55% (v/v) y ácido fórmico al 2,95% (v/v); estos valores corresponden a las concentraciones presentes en Sal CURB® líquido y Sal CURB® K2  líquido, respectivamente. Se añadió Bacillus subtilis PB6 (formulado en un producto CLOSTAT^TM) a todas las muestras de agua a un nivel de inclusión de 2.5 g / L. Las muestras de agua se almacenaran a temperatura ambiente sin agitar. La recolección de esporas se realizó después de 1 hy 24 h, después de 7 y 14 días.

Se utilizaron dos métodos ligeramente diferentes para contar las esporas de Bacillus subtilis PB6. Los viales se agitaron antes del muestreo y se tomaron dos muestras de 1 ml de cada vial. En el primer método, se utilizó una solución salina tamponada con fosfato (PBS) para la preparación de todas las diluciones. En el segundo, se utilizó agua de peptona (BPW) como diluyente para preparar las diluciones.

Los recuentos microbianos en diferentes formulaciones se analizaron utilizando Statgraphics Plus Versión 5.1 Professional Edition.

El Cuadro 1 muestra el pH de las muestras de agua tratada. Los recuentos totales de esporas de muestras de agua tratadas con diferentes inhibidores del crecimiento bacteriano se determinaron de acuerdo con los métodos de enumeración, PBS o BPW como diluyente, en los Cuadros 2 y 3, respectivamente.

Cuadro 1. Mediciones de pH de muestras de agua tratada

Se ha demostrado que el pH de las muestras de agua diluida tiene un efecto sobre la recuperación de esporas de PB6 de las muestras de agua tratada. El pH de las muestras de agua diluidas tratadas con Sal CURB® líquido, Sal CURB® K2 líquido y la concentración más alta de ácido fórmico todavía estaba por debajo de pH 6 cuando se utilizó la solución salina tamponada con fosfato (PBS) como diluyente, que nuevamente tiene efecto negativo sobre la recuperación de esporas (Cuadro 2). Sin embargo, la capacidad tamponadora del agua peptídica tamponada (BPW) fue lo suficientemente alta para recuperar el pH de todas las muestras de agua diluida por encima de pH 6,5.

Cuadro 2. Recuperación de esporas de Bacillus subtilis PB6 de muestras de agua tratadas con PBS como diluyente. Las medias ± desviaciones estándar seguidas de letras diferentes en las columnas son significativamente diferentes (p < 0,05, ANOVA, LSD).

 

No hubo una reducción significativa en el recuento de esporas de Bacillus subtilis PB6 cuando las muestras de agua se trataron con Sal CURB® líquido y se almacenaron durante 7 días (Cuadro 3).

Cuadro 3. Recuperación de esporas de Bacillus subtilis PB6 de muestras de agua tratadas según el método de enumeración utilizando BPW como diluyente. Las medias ± desviaciones estándar seguidas de letras diferentes en las columnas son significativamente diferentes (p < 0,05, ANOVA, LSD).