Actividad ureasica en expeller de soja Rojo Fenol

Emilia Clemente abajo va la técnica: 
DETERMINACIÓN DEL ÍNDICE DE ACTIVIDAD UREASICA
A.O.A.C. Ba 9-58

Definición:
Este método determina la actividad de la ureasa residual en productos de soja bajo condiciones de ensayo.

Alcance:
Aplicable a los alimentos de soja, harina de soja, y alimentos molidos de soja, excepto cuando ha sido agregada urea.

A.- Aparatos:

1.- Baño de María termostatizado a 30º C ± 0.5ºC.
2.- Potenciómetro de precisión con compensador de temperatura, teniendo una sensibilidad de ± 0.02 upH. Calibrar el potenciómetro con soluciones buffer de pH similares a la solución a medir.
3.- Tubos de ensayo de 20 mm x 150 mm con tapones de goma.

B.- Reactivos:

1.- Solución buffer fosfato, 0.05 M: Disolver 3.403 gr. de Fosfato de Potasio monobásico (PO4H2K, grado analítico) en aproximadamente 100 ml. de agua destilada. Disolver 4.355 gr. de Fosfato de Potasio dibásico (PO4HK2) en 100 ml. de agua destilada. Mezclar las dos soluciones en un matraz aforado de 1 lt. y completar a volumen con agua destilada. Si los reactivos son puros el pH será de 7.0. Si así no fuera ajustar a este valor agregando un ácido a base fuerte. La vida útil de la solución buffer así preparada es de menos de 30 días.
2.- Solución de urea bufferizada: Disolver 15 gr. de urea (p.p.a) en 500 ml. de la solución buffer fosfato. Agregar 5 ml. de tolueno que sirve como preservativo para prevenir la formación de hongos. Ajustar el pH de esta solución a 7.0 como se indicó en B1.

C.- Preparación de la muestra:

Moler la muestra hasta que resulte lo más fina posible y evitando que aumente mucho la temperatura. Homogeneizar. Como mínimo un 60% de la muestra debe pasar por un tamiz de 420 micrones.
La harina de soja no requiere molienda pero sí un buen homogeneizado.

D.- Técnica:

Pesar 0.400 gr. (± 0.001 gr.) de la muestra molida. Transferir a un tubo de ensayo (A3) y agregar 20 ml. de la solución de urea buffer (B2). Tapar el tubo y mezclar bien sin invertirlo. Sumergirlo en el baño de agua a 30 C (± 0.5 C). Preparar un blanco pesando otro 0.400 grs. (± 0.001 grs.) de muestra y transferirlo a otro tubo de ensayo y agregar 20 ml. de solución buffer de fosfato (B1). Tapar, mezclar sin invertir el tubo y colocar en el baño a 30 C (± 0.5 C).
Entre ambas preparaciones dejar un intervalo de 5 minutos. Agitar el contenido de cada tubo cada 5 minutos.
Transcurridos 30 minutos sacar los tubos del baño. Transferir el líquido sobrenadante de cada tubo a sendos vasos de precipitado de 30 ml. manteniendo un intervalo de 5 minutos entre ambos ensayos. Determinar el pH de los líquidos sobrenadantes a los 5 minutos exactamente de haber sido retirados del baño.

E.- Calculo:

La diferencia entre los valores de pH del ensayo y pH del blanco determinará el índice de actividad ureásica.