El citoesqueleto espermático y las alteraciones observadas después del proceso de criopreservación

Efraim González, Con base a la poca experiencia que tengo, no podría decirte respecto al efecto de la hipóxia y su relación con la membrana plasmática, puesto que en la zona en donde radico, nos encontramos muy cercanos a los tres mil metros sobre el nivel del mar, y no hemos observado una consecuencia directamente sobre los espermatozoides. Considero que más bien, deberías buscar otra alternativa para estudiar el metabolismo con diferente metodología. Saludos,

Estimado Fernando Cabrera, Me parece muy interesante su razonamiento y los buenos resultados que ha tenido, realizando la inseminación artificial con semen descongelado. Respecto a mi opinión en cuanto al método de descongelación, me permito comentarle que los dedicados a estudios de criopreservación, hacen mención de que una descongelación ideal, debería seguir una tasa inversa a la de congelación, es decir, si durante la congelación se está bajando la temperatura a razón de 1 grado centígrado por minuto, debería subirse a esa misma velocidad, lo cual es meramente teórico, puesto que no contamos con un aparato capaz de realizar la descongelación bajo esas condiciones. Por otro lado, hemos notado que al realizar la descongelación a 37 grados pero por menos de 20 segundos, y luego se ha observado al microscopio, se han observado los cristales de hielo y varios espermatozoides aún congelados y por supuesto sin motilidad espermática. Por lo que es recomendable que se descongelen las pajillas en baño maría y se mantengan unos 5 minutos a esa temperatura, para luego hacer la evaluación de la calidad seminal. Por otro lado, conocemos que la temperatura corporal de la vaca se encuentra incrementada cuando se encuentran receptivas o en celo, es decir, listas para ser inseminadas, lo cual, efectivamente descongelará el semen depositado en su totalidad, sin embargo, también es posible que el incremento súbito de la temperatura altere la membrana plasmática de los espermatozoides, acelerando su proceso de capacitación y reacción acrosomal, lo cual haría que el proceso se realizara de manera prematura y que llegaran menos espermatozoides a capacitarse en el sitio y momento adecuados, es decir, al ámpula. No obstante, sus resultados hablan por sí mismos, y en el caso del bovino, por ser una especie monótoca, no se ven reflejadas las posibles consecuencias de un manejo poco adecuado en la descongelación. Saludos cordiales.

Hola Guadalupe, Por supuesto, el citoesqueleto espermático tiene una abundante cantidad de microfilamentos de Actina, la cual se encuentra en una dinámica constante de acuerdo al estado fisiológico del espermatozoide, de hecho es la responsable de los reacomodos a nivel de membrana plasmática durante la capacitación y de que ocurra la reacción acrosomal. Al polimerizarse y despolimerizarse en la porción apical de la cabeza espermática, los microfilamentos de actina permiten que se de la unión de la membrana plasmática y la membrana acrosomal, lo cual provoca que se formen los pequeños poros en ambas membranas y con ello se permite la salida del contenido acrosomal. Saludos, y gracias por tu interés.

MVZ Sergio Fernández Mora, Las tinciones rápidas que normalmente se emplean nos sirven para ver el daño sobre las membranas plasmática y acrosomal de los espermatozoides, y tales daños son un reflejo de las alteraciones sufridas por el citoesqueleto (después del ciclo de congelación y descongelación), debido a que entre las funciones del citoesqueleto están las de mantener los dominios de membrana. Entre las tinciones más comunes que se utilizan estan la de eosina-nigrosina, la triple tinción, el uso de azul de tripán, y si se dispone de un microscopio de fluorescencia se utiliza la CTC (clortetraciclina), IP (yoduro de propidio), entre otras. Sin embargo para lograr ver el citoesqueleto primeramente se deben retirar las membranas tanto plasmática como acrosomal para exponer la teca perinuclear (que es la que se encuentra en la cabeza espermática)y posteriormente proceder a fijar y teñir las células. Cabe mencionar que existen tinciones que se emplean en células somáticas, las cuales tienen afinidad por las proteínas que forman el citoesqueleto como lo es el azúl de Coomassie, aunque en los espermatozoides, al menos personalmente, no se ha utilizado para observar el citoesqueleto, puesto que la microscopía electrónica brinda la posibilidad de observar ultraestructuralmente al citoesqueleto espermático. Muchas gracias, espero le sea de ultilidad ésta información.

Ingeniero Ciro González Ferreira, Gracias por su comentario. La foto mostrada es como regularmente se publican las micro fotografías tomadas mediante microscopía electrónica, mediante la técnica de tinción negativa, sin embargo no existe mucha diferencia con la observación real que se ve directamente bajo el microscopio, lo que cambia es el fondo, que se observa de color verde, mientras que las estructuras del espermatozoide se ven negras, así que en realidad no perdemos demasiado, claro que a color es mucho más llamativo.

Ing. Mauro V. Guzmán Gracias por su comentario. Tiene toda la razón, temas como el presente abren muchas inquietudes y creo que eso es muy bueno, puesto que el despertar tantas dudas más que dar respuestas directas no hará ser mucho más cuidadosos en el manejo del semen y sobre todo nos siembra esa semilla de búsqueda de respuestas, lo cual nos hace a todos investigadores, por lo que sugiero que sean revisados varios puntos dentro del proceso de congelación y descongelación. En cuanto a las pajillas o pajuelas se ha observado que las de diámetro menor transmiten de manera más homogénea la temperatura al interior de las mismas, ya sea durante la congelación o la propia descongelación, por lo que los daños a la población espermática contenida es menor que en las pajuelas de mayor calibre, sin embargo es importante monitorear de forma constante y rutinaria la temperatura de almacenamiento, puesto que muchas veces al disminuir el nivel de nitrógeno líquido se están afectando los espermatozoides puesto que se provocan cambios de temperatura. Por último quisiera comentar que valdría la pena utilizar una pajilla para evaluar el semen antes de emplearlo para la inseminación artificial, lo cual sería útil para valorar tanto el proceso de congelación-descongelación como nuestro propio método y de esa forma realizar las modificaciones necesarias para obtener mejores resultados al momento de la inseminación. Por otra parte en cuanto al número de espermatozoides contenidos por pajilla, el examen anterior podría darle la respuesta, puesto que en muchas ocasiones el aumentar la concentración espermática si podría llegar a compensar los daños sufridos y con ello se busca incrementar el porcentaje de sobrevivientes y por consecuencia el índice de fertilidad.

MVZ Raúl José Rangel Gracias por su comentario. efectivamente es un tema interesante y en mi caso diría que apasionante, creo que existe mucho por investigar acerca del manejo adecuado del semen criopreservado y la forma de disminuir las alteraciones celulares, próximamente enviaremos algunas recomendaciones generales respecto a los cuidados básicos que debemos considerar cuando se realiza la inseminación artificial a fin de minimizar el daño, este al pendiente y con un poco de paciencia.

MVZ Hernán Javier Arango, Agradezco mucho su amable comentario, respecto a su duda existen estudios en los cuales experimentalmente alteran al citoesqueleto espermático y al realizar in vitro la inyección intracitoplasmática han determinado que no es posible que se forme el pronúcleo masculino, mientras que en otros se ha observado que al tener el espermatozoide alteraciones graves en el citoesqueleto, éste es incapaz de interactuar con el ovocito y no en consecuencia no se logra la fertilización.

Ante todo hago extensiva mis felicitaciones por la calidad del trabajo que se ha publicado. Al compañero Campusano y a todos en general, por experiencia propia, y curiosidad he realizado la comparación y el estudio que relaciona la temperatura de descongelación con el porcentaje de preñes de las dosis seminales, cabe recalcar que no es algo para publicar por lo que no simplemente son esos los factores que afectan la estructura y fertilidad de la dosis, pero al tratar de aislar un poco y poner homogéneas las muestras y usando un diseño experimentar aleatorizado encontré como conclusión que la mejor temperatura del agua para la descongelación del semen y proceder a la inseminación es la de 24ºC. Hago énfasis en esta practica ya que es en este momento después de la congelación muchas veces donde el 70[percent] de los ezpermios no viables, que se observan en las dosis pierden o debilitan enormemente la sección del citoesqueletoTp y tal cual se explica en el articulo, el cito esqueleto, denota el volumen, contribuye en la orientación espermática, ayuda a la penetración del esperma en el ovulo, y por ende, es un esperma con su material genético en buen estado, cuando tiene en buen estado su cito esqueleto, y pudo vencer las barreras para realizar la fecundación. En cuanto a los embriones, también afecta, muchas veces hemos observado y se que todos lo han hecho, que los becerros obtenidos por inseminación artificial, son mas delicados en los primeros estadios de subida, hablo de las primeras 2 horas, donde se pone de pie, y comienza a beber el calostro, hay diferencia con los animales obtenidos por la monta natural, esto es una observación, que no esta asegurado con la base científica mas bien en la practica, pero muchas veces para realizar un estudio hay que relacionar ambas y obtener resultados cercanos a la realidad. Att. Ing. Carlos Jiménez Marchan.

Me parece bastante interesante el artículo y ojalá sirva como un inicio para mas estudios que determinen de una forma cuantitiva el efecto de la congelación-descongelación sobre la viabilidad del semen y la integridad de los espermatozoides y que además se analice la posibilidad de realizar cambios en los procedimientos actuales con el fin de mejorarlos y aumentar las posibilidades de preñez en estos tipos de manejo reproductivo.