Entrega de medio de cultivo para el proceso de búsqueda, selección y clasificación (bsc) de oocitos bovinos

Publicado: 24 de junio de 2024

Por: María de los Ángeles Cortés Escobar,David Leonardo Gómez López, Juan Felipe Martínez Rocha. Agrosavia

Los medios de lavado y sobre todo de maduración in vitroson especiales ya que contienen nutrientes y otros componentes que brindan las condiciones necesarias para el desarrollo de los oocitos hasta finalizar la etapa de maduración. Además, tienen soluciones búfer que estabilizan el pH y están optimizadas para funcionar en el ambiente de cultivo enriquecido con dióxido de carbono (CO₂).

¡Importante! Es primordial contar con el medio de aspiración folicular (medio opu) para realizar el proceso de aspiración folicular (opu). Este medio no requiere una atmósfera de CO₂ y por lo general es una solución salina amortiguada con fosfatos (pbs), suplementada con albúmina sérica bovina (bsa) o alcohol polivinílico (pva), y es utilizado para el mantenimiento inicial de los oocitos durante la búsqueda. Nota: El laboratorio no proporciona el medio de aspiración (medio opu).

Recuerde: No usar solución salina fisiológica estéril sin ningún suplemento como medio de aspiración folicular y de búsqueda, ya que no tiene las condiciones y suplementos adecuados para soportar el mantenimiento inicial de los oocitos.

De acuerdo con lo anterior, el laboratorio entrega los siguientes medios de lavado y de maduración de oocitos:

1. Medio de maduración in vitro: Se entrega en tubos de 5 mL con adición de 400 μL de medio de maduración y una capa de 300 μL de aceite mineral testeado para fiv. El medio de maduración depende de una atmósfera de CO₂ para estabilizar su pH, por lo tanto, a los tubos de 5 mL se les inyecta una mezcla de gases con 5 % de CO₂, 5 % de O₂ balance con nitrógeno, y posteriormente se sellan con un tapón de silicona para mantener la atmósfera de gas (figura 9). En todo momento, el tubo de 5 mL debe permanecer en posición vertical.

Figura 9. Tubo de 5 mL con medio de maduración in vitro, aceite mineral testeado para fiv y sellado con un tapón de silicona. Foto: Mayerli Andrea Murillo Espinosa

¡Importante!

Los tubos de maduración siempre deben estar en posición vertical, y bajo ningún motivo se deben voltear, agitar ni revolver.
La cantidad de tubos de maduración para despachar depende del número de vacas donadoras que se someterán al proceso de aspiración folicular.

2. Medio de lavado: suministrado en tubos de centrífuga de 15 mL (figura 10), el volumen de medio de lavado varía según el número de donadoras sometidas al procedimiento de aspiración folicular. Se proporcionan aproximadamente 150 μL de medio de lavado por vaca donadora.

Figura 10. Medio de lavado en tubo de centrífuga de 15 mL.Foto: David Leonardo Gómez López

El medio de lavado también depende de una atmósfera controlada de CO2, por lo tanto, se entrega gasificado con la misma mezcla de gas utilizada en los tubos de maduración in vitro.

Estos medios de cultivo son despachados en nevera de icopor con varios geles refrigerantes (figura 11), para asegurar una temperatura de 2 a 8 °C.

Figura 11. Nevera de icopor con los medios proporcionados por el laboratorio para llevar a cabo el proceso de lavado y maduración in vitro.Fuente: Elaboración propia

¡Importante!

Se deben solicitar los medios de lavado y maduración con anticipación, con el fin de coordinar logística y calendario del laboratorio.

Los medios deben ser recogidos en las instalaciones del lra de agrosavia, en el ci Tibaitatá.

3° Capítulo del manual Guía de manejo de oocitos bovinos durante su colecta y envío para la producción in vitro de embriones. Gómez López, D. L., Cortés Escobar, M. A., & Martínez Rocha, J. F. (2023). Guía de manejo de oocitos bovinos durante su colecta y envío para la producción in vitro de embriones. Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria (agrosavia). https://doi.org/10.21930/agrosavia.nbook.7406559

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