Procedimiento de búsqueda, selección y clasificación (bsc) de oocitos bovinos

Publicado: 24 de junio de 2024

Por: María de los Ángeles Cortés Escobar, David Leonardo Gómez López, Juan Felipe Martínez Rocha. Agrosavia.

Una vez recibido el tubo de 50 mL con el producto de la aspiración (opu), se debe filtrar el líquido folicular. Para ello se utiliza un filtro estéril de células de 70 micras y en él se vierte todo el contenido del tubo de 50 mL, con lo cual quedan en el filtro aquellas estructuras mayores de 70 micras. Para aclarar el contenido del filtro, que por lo general es de un color rojizo, se debe usar el medio de aspiración (medio opu) hasta que el líquido quede claro y de esta forma se puedan observar los oocitos con la luz del estereoscopio.

¡Importante! Asegurar que todo el contenido del tubo de 50 mL se vierta sobre el filtro de 70 micras para garantizar que no se pierdan oocitos. Para ello, es útil lavar las paredes del tubo con medio de aspiración (medio opu).

Posteriormente, el contenido del filtro de 70 micras se debe traspasar, con la ayuda de una pipeta plástica estéril de 3 mL, a una placa de Petri de 60 mm con líneas guía en su parte externa. En una caja de Petri adicional se colocan tres gotas de 50 μL de medio de lavado.

Se procede entonces a realizar la búsqueda según las recomendaciones del apartado “Selección de oocitos bovinos”, y una vez identificados, se traspasan a la primera gota de lavado, cuidando que no queden oocitos de óptima calidad en la placa de Petri. Los oocitos seleccionados de la primera gota deben pasar por las siguientes dos gotas de lavado, con el fin de quitar la mayor cantidad de impurezas y detritos, y evitar una posible contaminación.

¡Importante! El proceso de búsqueda, selección y clasificación (bsc) debe realizarse en la menor cantidad de tiempo posible, con el fin de evitar cambios de pH y osmolaridad que puedan comprometer el desarrollo de los oocitos.

Finalmente, se realiza la clasificación de los oocitos y se anota en el formato de búsqueda, selección y clasificación. En seguida son transferidos al fondo del tubo de maduración in vitro, proceso que se puede verificar a contraluz, con la precaución de no presionar la punta de la pipeta contra las paredes y/o fondo del tubo de maduración. Posteriormente, se gasifica y se cierra el tubo con el tapón de silicona, tal como se muestra en la figura 14.

El proceso de bsc de oocitos se repite tantas veces como sea necesario para cada vaca donadora sometida a aspiración folicular.

Figura 14. Gasificación del tubo de maduración in vitro con la mezcla de gas (5 % CO₂, 5 % O₂, balance con nitrógeno). Foto: David Leonardo Gómez López

El tubo de maduración in vitro contiene los oocitos y el medio de maduración. Cada gasificación con la mezcla de gasdebe durar de 10 a 20 segundos. Una vez gasificado el tubo, se debe cerrar con rapidez con un tapón de silicona para evitar la salida del gas introducido.

¡Importante!

Los tubos de maduración in vitro que contienen los oocitos deben marcarse individualmente con un número consecutivo de aspiración y el número de identificación de la vaca donadora.
Se deben colocar máximo 50 oocitos por tubo de maduración in vitro; en caso de tener más oocitos de la misma donadora, se utiliza un nuevo tubo.

Procedimiento de búsqueda, selección y clasificación (bsc) de oocitos bovinos

6° Capítulo del manual Guía de manejo de oocitos bovinos durante su colecta y envío para la producción in vitro de embriones. Gómez López, D. L., Cortés Escobar, M. A., & Martínez Rocha, J. F. (2023). Guía de manejo de oocitos bovinos durante su colecta y envío para la producción in vitro de embriones. Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria (agrosavia). https://doi.org/10.21930/agrosavia.nbook.7406559

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