Tratamientos hormonales aplicados posterior a la IATF sobre la tasa de preñez y la viabilidad embrionaria en vacas de alta producción en estrés térmico

INTRODUCCIÓN

Uno de los grandes problemas en los sistemas de producción lechero es la elevada tasa de mortalidad embrionaria (Thatcher et al., 1994; Vanroose et al., 2000; Sreenan et al., 2001). Según Wathes (1992), la mayoría de estas pérdidas embrionarias se producen en los primeros días de la fecundación y durante la implantación del embrión. Se considera que una fecundación fértil (80-100%) por monta natural es seguida por una tasa de concepción del 70%, de allí que pérdidas entre el 10 y el 30% pueden deberse a problemas relacionados con el reconocimiento materno y factores genéticos, de manejo, estrés y de salud entre otros (Diskin y Morris, 2008).

En el tema de mortalidad embrionaria se deben diferenciar dos grandes momentos en el desarrollo del concepto: la etapa previa al reconocimiento materno de la preñez (primeros 14 días) y la etapa del desarrollo embrionario tardío que corresponden a la etapa después del reconocimiento materno de la gestación (BonDurant, 2007). En este segundo periodo no solamente se da el proceso de organogénesis, sino que también se inicia la formación de la placenta, la cual culmina hacia el día 90 de gestación, de allí que cualquier alteración entre la fertilización y los 90 días de desarrollo embrionario-fetal tienden a ser letales (BonDurant, 2007; Diskin y Morris, 2008).

Bartolomé et al. (2012) indica que la aplicación de la hormona gonadotrofina coriónica equina (eCG) al día 22 después de la Inseminación Artificial a Tiempo Fijo (IATF) incrementa el número de vacas preñadas con baja condición corporal, y que la aplicación de la hormona gonadotrofina corionica humana (hCG) al día 29 de la gestación reducía las perdidas embrionarias e incrementaba el número de cuerpos lúteos (CL) accesorios, pero el uso de hCG al día 29 de la gestación sin el uso de eCG al día 22 reducía la fertilidad.

Es posible que el manejo farmacológico pos-inseminación tenga un efecto positivo, no solamente sobre la función luteal, sino que también con la remodelación del endometrio para mejorar el reconocimiento materno y el inicio de la implantación. Por tal motivo, el presente trabajo estudió el efecto de la administración de la hormona liberadora de gonadotrofinas (GnRH), hCG y eCG al día 14 pos-inseminación evaluando las tasas de preñez y mortalidad embrionaria en ganado lechero de alta producción.

MATERIALES Y MÉTODOS

El presente estudio se llevó a cabo en la Lechería ANCALI de Los Ángeles, VIII región, Chile, durante los meses de diciembre de 2012 hasta marzo de 2013 (T° máxima y humedad relativa promedio del periodo: 27.7±3.6 °C y 53.4±13.4%), en colaboración con el Laboratorio Pfizer y el Instituto de Ciencia Animal (Laboratorio de Reproducción Animal) de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Austral de Chile.

Se utilizaron 234 vacas lecheras entre 1 a 6 partos, con un rango de peso vivo desde los 530 a 640 kg, promedio de días posparto de 135.7 ± 89, número de lactancias 1.9 ± 1.0, condición corporal de 3.28 ± 0.23 y producción diaria de leche de 45 ± 4.0 L. Los animales fueron manejados en un sistema free stall sometidas a tres ordeños diarios, alimentados con una dieta basada en ensilaje de maíz y alfalfa recibiendo una ración TMR (Ración Total Mezclada) más agua ad libitum. A todos los animales se les realizó un examen reproductivo mediante el uso de un espéculo más ecografía transrectal (Well WED-180 con un transductor lineal de 6.5 Mhz) para excluir vacas con patologías ováricas o uterinas.

Diseño Experimental

Las vacas (n=234) fueron sincronizadas mediante un protocolo estándar de sincronización de celo-ovulación para IATF. Al inicio del tratamiento (día -10) recibieron 2 mg de benzoato de estradiol (Syntex) i.m. y un dispositivo intravaginal con 1.39 g de progesterona (CIDR®, Pfizer). Los dispositivos fueron retirados 8 días después (día -2) y se les aplicó vía i.m. 25 mg de Trometamina de Dinoprost-PGF_2á (Lutalyse®, Pfizer), 400 UI de eCG (Novormon®, Syntex) y 1 mg de cipionato de estradiol (ECP®, Pfizer). La inseminación artificial a tiempo fijo (IATF) fue realizada a las 52-56 h posterior al retiro del CIDR (día 0).

Al día 14 posterior a la IATF, los animales fueron asignados al azar a cuatro grupos experimentales para recibir una administración intramuscular de: A: Suero salino (n=56); B: 100 µg de un agonista de GnRH, acetato de gonadorelina (Fertiline, n=58); C: 1500 UI de hCG (n=60); D: 400 UI de eCG (n=60). Diez vacas de cada grupo fueron ecografiadas los días 14, 16 y 22 pos-IATF para detectar cambios en la estructura luteal y la posible presencia de CL accesorios; además se les tomó una muestra de sangre los días 14, 16, 18, 20 y 22 para determinar la concentración plasmática de progesterona. El diagnóstico de gestación (DX) y seguimiento de la preñez fue realizado en todos los animales mediante examen ecográfico los días 34, 42 y 60 pos-IATF.

Progesterona Plasmática

Las muestras de sangre (5-7 ml) se tomaron de la vena coccígea y colectadas en tubos con 100 µl de heparina. Las muestras se almacenaron en hielo hasta la centrifugación que se realizó dentro de una hora a 2000 rpm durante 15 minutos. El plasma se separó y congeló a -20 °C hasta la determinación de la concentración de progesterona usando un kit comercial de radioinmunoanálisis (kit PROG-RIA-CT, DIA Source ImmunoAssays, Belgium). El coeficiente de variación intra-ensayo fue de 4.1 y 3.3% para baja y alta concentración plasmática respectivamente (1.27 ± 0.05 y 4.08 ± 3.3 ng/ml, respectivamente). El coeficiente de variación inter-ensayo fue de 8.6 y 6.5% para baja y alta concentración plasmática, respectivamente (1.17 ± 0.10 y 3.93 ± 0.26 ng/ml). La sensibilidad del ensayo fue de 0.05 ng/ml.

Tratamientos hormonales aplicados posterior a la IATF sobre la tasa de preñez y la viabilidad embrionaria en vacas de alta producción en estrés térmico - Image 1

Análisis Estadístico

La tasa de preñez fue comparada entre los grupos mediante la prueba de Chi cuadrado. Las concentraciones plasmáticas de progesterona fueron analizadas mediante análisis de varianza para muestras repetidas mediante MIXED modelo. La comparación de las medias se hizo con las pruebas de Tukey, Duncan y Bonferoni en el programa SAS 1996.

RESULTADOS

Tasa de Preñez

La tasa de preñez fue significativamente mayor en las vacas tratadas con- GnRH (p<0.05) en todos los periodos de evaluación, mientras que fue menor y constante para los grupos Control y hCG. En el grupo eCG se observó una pérdida fetal entre el día 45 y 60 de la gestación, representando el 3% del total de vacas preñadas del estudio (Cuadro 1). En el grupo tratado con hCG se observó una mayor, pero no significativa proporción de vacas preñadas con CLa.

El área total de tejido luteal y el diámetro del CL permanecieron constantes en las vacas preñadas (Figura 1); sin embargo, en las vacas que no llegaron a preñar, el área total de tejido luteal y el diámetro del CL fueron estadísticamente mayores (p<0.02) en los grupos Control, GnRH y hCG con respecto al grupo eCG al día 16 pos-tratamiento (Figura 2).

La concentración de progesterona en vacas preñadas fue significativamente mayor en las vacas tratadas con hCG (p<0.007) desde el día 16 hasta el día 20 pos-tratamiento (Figura 3). Así mismo, la concentración de progesterona plasmática en las vacas vacías fue significativamente mayor en el grupo Control y en las tratadas con hCG (p<0.01) los días 18 y 20 pos-tratamiento (Figura 3).

DISCUSIÓN

En el presente estudio se demostró que la GnRH tuvo un efecto positivo en la eficiencia reproductiva del ganado lechero, al aumentar la tasa de preñez y mantener la sobrevivencia embrionaria fetal en el grupo tratado, luego de su aplicación 14 días posteriores a la inseminación artificial en comparación al grupo control y los grupos tratados con eCG y hCG. Se debe destacar, asimismo, que las tasas de preñez obtenidas en estos últimos grupos fueron bajas. Contrastando datos reportados por otros autores, Bartolome et al. (2012) obtierron 50% de preñez al administrar eCG el día 22 de la IA en comparación con el 33% del grupo control, mientras que Narváez (2010) obtuvo 50.6% con eCG entre los días 16 y 22 y 44.9% para el grupo control. Con el uso de hCG, Rajamahendran y Sianangama (1992) reportan tasas de 50, 78 y 44% de preñez luego de la administración los días 0, 7 y 14 de la IA, respectivamente, mientras que Santos et al. (2001) administrando hCG 5 días de la IA encontraron tasas de preñez en los grupos tratados y control de 46 vs 39% al día 28, 40 vs 36% al día 45 y 38 vs 32% al día 90 de la IA. Por otro lado, Rendel (1997) reportaron tasas de preñez en Chile de 52-55% para vacas tratadas con GnRH al momento de la IA y 7 días después.

En la evaluación de los resultados obtenidos se debe considerar que la fase experimental fue llevada a cabo entre diciembre y marzo, con temperatura ambiental de 27.7 ±3.4 °C y humedad de 52 ±13%, mientras que el rango óptimo de temperatura para el ganado bovino lechero se encuentra entre 13 y 18 °C, con temperatura límite entre 21.1 y 32.2 °C (López et al., 2003). El aumento de la temperatura ambiental tiene un impacto nocivo en la duración del estro, en el crecimiento y desarrollo folicular y en el desarrollo embrionario (De Rensis y Scaramuzzi, 2003; Jordan, 2003). En un estudio de 10 años em España, López-Gatius (2003) reportó tasa de preñez promedio para los animales inseminados en el periodo de verano de 27.4%, mientras que en otros periodos del año fue de 44.4%.

La tasa de preñez entre el grupo control y el grupo tratado con eCG fue similar, lo cual no concuerda con resultados obtenidos por otros autores, quienes reportaron frecuencias de preñez mayores con el uso de eCG (Núñez, 2011; Bartolome et al., 2012).

El grupo tratado con GnRH presentó una tasa de preñez significativamente mayor que los grupos tratados con eCG, hCG y del control, sugiriendo que esta hormona podría tener un mayor efecto sobre la fertilidad de vacas lecheras que experimentan estrés térmico en comparación a los otros preparados hormonales. Los resultados son coincidentes con los trabajos de Willard et al. (2003) y Lopez-Gatius et al. (2006), quienes aplicaron GnRH en días posteriores a la IA a vacas lecheras bajo condiciones estrés por calor.

La mortalidad embrionaria en el ganado bovino ha sido estimada entre 20 y 40% (Vanroose et al., 2000; Sreenan et al., 2001), e incluso menor (Santos et al., 2004). En el presente estudio solo se pudo detectar una pérdida fetal en el grupo tratado con eCG, pero se debe tomar en consideración que la metodología empleada no permitió detectar pérdidas embrionarias antes de los 20-22 días de la IA. Al igual que en este estudio, Núñez (2011) reportó pérdidas de gestación en vacas de carne al día 60, luego de la aplicación de eCG 14 días pos-IA; así mismo, Bartolome et al. (2012) reportaron pérdidas (3/40) en ganado lechero tratado con eCG a los 22 días pos-IA, pero menores que en el grupo control (6/28).

No se encontraron diferencias en el número de CL accesorios inducidos por los tratamientos hormonales en el presente trabajo. No obstante, Bartolome et al. (2006) observaron un mayor número de CL accesorios en vacas con implantes de Deslorelina al día 45 de gestación comparado con el grupo control (45.4 vs 10.1%), y sin que llegasen a presentar pérdidas fetales. Un estudio en el país reportó CL accesorios en el 78.7% de vacas tratadas con Buserelina al día 7 posIA (Rendel 1997), mientras que GarciaIspierto y López-Gatius (2012) encontraron nuevas estructuras lúteas en el 60% de las vacas luego de la administración de GnRH 5 días pos-IA. En diferentes estudios, la administración de hCG y GnRH en distintos momentos pos-IA aumentó el número de CL accesorios, aumentando con ello la concentración de progesterona y la tasa de preñez (Rajamahendran y Sianangama 1992; Schmitt et al., 1996; Rendel, 1997; Rajamahendran et al., 1998; Santos et al., 2001).

El área y el diámetro de los CL en los tres grupos de aplicación hormonal se mantuvo constante en las vacas preñadas, pero tendiendo a disminuir en las vacas vacías tratadas con eCG (Figuras 1 y 2), y coincidiendo con el perfil de progesterona plasmática (Figura 3). Zahid y Cahit (2010) encontraron mayores niveles de progesterona y sin cambios considerables en el grupo tratado con GnRH más hCG. En forma similar, Cruz et al. (2009), trabajando con vacas de alta producción sometidas a estrés calórico consiguieron lecturas similares al presente estudio.

CONCLUSIONES

El tratamiento con GnRH 14 días posIATF incrementa la tasa de preñez en vacas de alta producción que experimentaron estrés calórico.

Tratamientos hormonales aplicados posterior a la IATF sobre la tasa de preñez y la viabilidad embrionaria en vacas de alta producción en estrés térmico

BIOLYS®

FIGAP - Exposición Internacional