Proceso de criopreservación de la muestra seminal

Publicado: 5 de junio de 2024

Por: David Leonardo Gómez López,María de los Ángeles Cortés Escobar,Juan Felipe Martínez Rocha. Agrosavia

¡Importante! Es necesario entender que la curva de frío inicia cuando la muestra se obtiene del toro donante, a una temperatura aproximada de 34 °C; por lo tanto, se debe tener el diluyente en baño maría a la misma temperatura para evitar un choque térmico.

Si se siguen las recomendaciones de embalaje explicadas anteriormente (figura 13), la temperatura de las muestras seminales durante su transporte al laboratorio desciende hasta alcanzar los 2-8 °C. Una vez recibidas, las muestras se mantienen a la misma temperatura de refrigeración para continuar con los análisis microscópicos (tabla 3). Las muestras aceptadas se someten entonces al proceso de dilución, empaque y sellado dentro de pajillas previamente marcadas con la información del toro donador.

Una vez el lote de pajillas está listo para criopreservación, el descenso secuencial de la temperatura se realiza con equipos de congelación especializados que permiten reducir la temperatura en cuestión de minutos, desde los 5 °C hasta los -158 °C (figura 2d). En este punto, las pajillas están listas para ser sumergidas en nitrógeno líquido (figura 2e) y conservarse en termos criogénicos a una temperatura de -195.8 °C (figura 2f).

A continuación, se detalla el descenso secuencial de la temperatura de la muestra seminal desde que es colectada hasta su criopreservación (figura 16).

Figura 16. Ilustración del descenso de temperatura del semen bovino desde la toma de la muestra hasta su criopreservación. Fuente: Elaboración propia

Criterios de aceptación o rechazo durante la evaluación de la prueba de las pajillas posdescongelación

Antes de llenar, sellar y congelar todo el lote de pajillas, se debe llevar a cabo una prueba de criopreservación y posdescongelación con una o dos pajillas. Estas últimas constituyen una muestra representativa del lote y se evalúan de acuerdo con los siguientes criterios de aceptación:

I. Motilidad espermática individual progresiva (figura 17a): En etapa de posdescongelación, se esperan valores ≥30 %.

II. Morfología espermática (figura 17b): Se esperan valores de normalidad morfológica ≥70 %.

III. Vitalidad espermática (figura 17b): Se esperan valores de integridad de membrana ≥30 %.

IV. Concentración espermática por pajilla: Se esperan valores superiores a 35 × 106de espermatozoides por pajilla de 0,5 mL. Sin embargo, este parámetro puede variar si su valor es concertado previamente (figura 17a).

Figura 17. Calidad espermática posdescongelación. a. Evaluación de motilidad individual progresiva y concentración espermática; b. Morfología espermática. Foto: David Leonardo Gómez López

¡Importante! Si la concentración espermática sigue siendo muy alta en la prueba posdescongelación con respecto a lo concertado o esperado, el profesional de laboratorio puede agregar diluyente hasta llegar al valor deseado, siempre y cuando no se afecten otros parámetros de calidad.

Una vez evaluados y aceptados estos criterios, se procede a llenar, sellar y congelar todo el lote de pajillas. Estas se almacenan en termos criogénicos con nitrógeno líquido y se entregan al usuario del servicio.

Las pajillas se conservan de este modo hasta que son utilizadas (por ejemplo, en programas de ia o fiv).

Luego de la criopreservación de todo el lote, se puede llevar a cabo una prueba aleatoria de las pajillas congeladas, a fin de confirmar que los mismos parámetros evaluados en la prueba posdescongelación se cumplen para todo el lote de pajillas criopreservadas, tal como se muestra en la tabla 6.

Tabla 6. Evaluación microscópica del lote de posdescongelación

¡Importante! La fertilidad y viabilidad del semen criopreservado se puede mantener por un tiempo indefinido, siempre y cuando se conserve el material en termos criogénicos y en todo momento las pajillas estén sumergidas en nitrógeno líquido.

Conclusión

La producción de pajillas de semen criopreservadas implica una serie de pasos coordinados que van desde la obtención de la muestra seminal hasta el envío, dilución, empajillado, congelación y almacenamiento. Si una de estas etapas no se realiza de manera óptima, se compromete la fertilidad y/o no habrá producción de pajillas criopreservadas. Por el contrario, si todos los anteriores pasos se llevan a cabo de forma adecuada, el material seminal congelado puede preservarse por muchos años, con garantía de viabilidad y fertilidad para futuros programas de inseminación artificial o para procesos de producción de embriones in vitro.

7° Capítulo del manual (2023). Guía de manejo del semen bovino durante su colecta y envío para la criopreservación de pajillas seminales. Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria (agrosavia). https://doi.org/10.21930/agrosavia.analisis.7406436

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