Efecto de la frecuencia de aspiraciones foliculares sobre la recolección ovocitaria para la producción in vitro de embriones en vacas Holstein

Publicado: 12 de enero de 2024

Por: Esteban AJR 1, *, Morales GJL 1, Mellado BJA 1, Calderón LMG 1, Palacios EA 2.,Véliz DFG 1, Pedroso SR 3.1, * Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro, Periférico Raúl López Sánchez, C.P.27054, Torreón, Coahuila, México. 2Universidad Autónoma de Baja California Sur.3Universidad Técnica de Manabí.

Resumen

El objetivo del estudio fue evaluar la frecuencia de aspiraciones foliculares sobre la producción ovocitaria y embrionaria de vacas Holstein. Para llevar a cabo este estudio se seleccionaron de un establo lechero comercial un total de 16 vacas de la raza Holstein Friesian en similares condiciones de salud y estado reproductivo. Las vacas se seleccionaron de acuerdo a características genotípicas y fenotípicas. Se realizaron aspiraciones foliculares frecuentes con 15 días de intervalo cada una. El experimento se llevó cabo aspirando el total de 16 vacas mediante ultrasonografía por la técnica de Ovum Pick-Up, aspirando todos los folículos visibles al ultrasonido, y se midió la producción ovocitaria tanto de calidad como en cantidad, posteriormente los ovocitos se sometieron al proceso de producción de embriones in vitro, donde se evaluó la producción por cada sesión de OPU. Se realizó una primera aspiración hasta llegar a un total de 5 aspiraciones. Las variables a evaluar del experimento fueron la cantidad y calidad ovocitaria producida por cada sesión de OPU, la cantidad y calidad de los embriones producidos por cada sesión de OPU. Mientras que el Análisis Estadístico se realizara de la siguiente forma; los datos de la cantidad y calidad ovocitaria y embrionaria se analizaran mediante un Modelo Lineal General (GLM) y prueba de comparación de medias y se utilizara el paquete estadístico SAS v 9.00 (2002).

Palabras clave: Biotecnologías, reproducción, aspiración folicular, embriones.

Introducción

El desarrollo y la aplicación de las nuevas biotecnologías son necesarias para aumentar la eficiencia reproductiva, hoy en día la producción in vitro de embriones (PIVE) se ha constituido como una herramienta para el mejoramiento genético y productivo en el ganado bovino (Sirard, 2018). Esta técnica se caracteriza por lograr dentro de un laboratorio la fecundación de ovocitos, los cuales pueden ser obtenidos de los ovarios de animales sacrificados o recolectados de animales vivos mediante la técnica de aspiración transvaginal guiada por ecografía conocida como Ovum Pick-Up (OPU) (Nava y Hernández, 2005), siendo esta última la mejor alternativa para lograr la colecta de ovocitos de animales vivos de alto valor genético, para su posterior maduración, fecundación y cultivo in vitro (Lonergan y Fair, 2016). Diversos estudios han demostrado que tanto la cantidad como la calidad de ovocitos recuperados por OPU son factores esenciales para el éxito de los programas PIVE en el ganado bovino (Santos et al., 2016), y que la aspiración de todos los folículos visibles en el ovario induce la emergencia de una nueva onda de desarrollo folicular alrededor de 24 a 48 horas después (Sandoval et al., 2019), por lo tanto, cada vez que se realiza la aspiración folicular se sincroniza una nueva onda (Surjus et al., 2014). La OPU puede realizarse en días aleatorios al ciclo estral (Pontes et al., 2011), pero se han encontrado mejores resultados al inicio de la emergencia folicular (Seneda et al., 2020), aspirándose folículos más pequeños, y obteniendo mejores tasas de recuperación y mejor calidad ovocitaria debido a la ausencia de eventos atresiales de los mismos (Cavalieri et al., 2018). Actualmente la OPU en combinación con la fertilización in vitro (FIV), mejora y aumenta la producción de embriones, y es considerada como la técnica más efectiva para el avance genético bovino (Mapletoft, 2013). Principalmente en el ganado Holstein los resultados en cuanto a la colecta de ovocitos que se ha observado mediante OPU son bajos, debido en parte al desgaste energético que tienen por ser vacas altas productoras de leche, afectando el soporte gonadotrófico e influyendo en su calidad ovocitaria (Amiridis et al., 2006), aunado a problemas con el estrés calórico que estas sufren por el aumento de la temperatura ambiental (Jeelani et al., 2019). Se podría pensar que aspirar a las donantes con mayor frecuencia podría provocar un aumento en las ondas foliculares, por ende, una posibilidad de aumento de la colección de células germinales. Sin embargo, es importante señalar que son muy pocos los estudios en ganado Holstein donde se reporte el efecto de la OPU en la producción ovocitaria. Por tales razones, hipotetizamos que la frecuencia de la aspiración podría influir en los resultados de la OPU para la obtención de ovocitos y en la producción de embriones in vitro. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue evaluar si la frecuencia de aspiraciones foliculares mediante OPU influye en la cantidad y calidad de ovocitos obtenidos para la producción de embriones in vitro de vacas Holstein.

Materiales y métodos

Localización y condiciones climáticas de la región donde se desarrolló el estudio

El estudio se realizó en un establo lechero comercial localizado en la zona de la Comarca Lagunera del norte de México. Sus coordenadas son 25° 44’ 36’’ N y 103° 10’ 15’’ O; 1,111 msnm. Esta región se caracteriza por presentar un clima cálido extremo, en verano con temperaturas de hasta 45 °C y en invierno puede de hasta 0 °C, con una precipitación anual de 240 mm y humedad relativa de 25 a 55 % (CONAGUA, 2020).

Diseño del experimento

Se utilizaron un total de 16 vacas multíparas seleccionadas como donadoras de ovocitos, con un historial de alta producción láctea (> 10,000 kg/lactancia) con un promedio mayor a 6 lactancias, oscilando entre 3-4 meses de haber parido, con una condición corporal (CC) de 3.5 en una escala de 1-5 (Bernabucci et al., 2005). Se les realizó un total de 5 aspiraciones con un intervalo de 15 días entre aspiraciones.

Figura 1. Aspiración folicular in vivo Ovum Pick-Up (OPU) para la recolección de los complejos cúmulos-ovocitos (CCO´s).

MVZ - EFECTO DE LA FRECUENCIA DE ASPIRACIONES FOLICULARES SOBRE LA RECOLECCIÓN OVOCITARIA PARA LA PRODUCCIÓN IN VITRO DE EMBRIONES EN VACAS HOLSTEIN - Image 1

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Obtención de los complejos cumulo-ovocito por medio de OPU.

La OPU se realizó aspirando todos los folículos visibles en el ovario para la obtención de los complejos cúmulos-ovocitos (CCO´s). El equipo utilizado de ultrasonido fue un (CHISON, Digital Ultrasound System, Model: 8300 VET. 5.0 MHz Sectorial) el cual se ajustó a un transductor vaginal acoplado a una sonda guía de aspiración folicular con una aguja desechable de 20 G × 2" (Jelco Plus), unido por medio de una línea de aspiración de silicón a la bomba de vacío (Pionner Pro Pump, Pioneer Pro Pump Single -115v, Single Foot Pedal, PS 653, Canadá) y a un tubo cónico de 50 ml para la recolección, siguiendo el procedimiento descrito por (Solís et al., 2012).

Los CCO’s recolectados fueron contados, evaluados y clasificados morfológicamente, en base a los criterios propuestos por De Loos et al, (1989) utilizando los CCO´s de grado I, II y III. El proceso de producción de embriones in vitro (PIVE) se realizó de acuerdo a lo descrito por (Cavalieri et al., 2018), dicho proceso se realizó en el laboratorio del Centro de Biotecnología de la Reproducción de la Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro, Unidad Laguna, donde los embriones obtenidos fueron evaluados y clasificados morfológicamente de acuerdo a lo establecido por (Bó y Mappletoft, 2013).

Análisis Estadístico

Los datos de la cantidad y calidad ovocitaria y embrionaria se analizarán mediante un Modelo Lineal General (GLM) y prueba de comparación de medias y se utilizará el paquete estadístico SAS v 9.00 (2002).

Resultados preliminares

1.- Ovocitos recuperados por medio de OPU

2.- Total de embriones producidos por sesión de OPU.

Esta publicación pertenece al XXI Congreso Internacional de MVZ especialistas en bovinos

Bó, G. A., & Mapletoft, R. J. (2013). Evaluation and classification of bovine embryos. In Anim. Reprod., v (Vol. 10, Issue 3).

Cavalieri, F. L. B., Morotti, F., Seneda, M. M., Colombo, A. H. B., Andreazzi, M. A., Emanuelli, I. P., & Rigolon, L. P. (2018). Improvement of bovine in vitro embryo production by ovarian follicular wave synchronization prior to ovum pick-up. Theriogenology, 117, 57–60. https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2017.11.026

Jeelani, R., Konwar, D., Khan, A., Kumar, D., Chakraborty, D., & Brahma, B. (2019). Reassessment of temperature-humidity index for measuring heat stress in crossbred dairy cattle of a sub-tropical region. Journal of Thermal Biology, 82, 99–106. https://doi.org/10.1016/j.jtherbio.2019.03.017

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Santos, G. M. G. dos, Silva-Santos, K. C., Barreiros, T. R. R., Morotti, F., Sanches, B. V., de Moraes, F. L. Z., Blaschi, W., & Seneda, M. M. (2016). High numbers of antral follicles are positively associated with in vitro embryo production but not the conception rate for FTAI in Nelore cattle. Animal Reproduction Science, 165, 17–21. https://doi.org/10.1016/j.anireprosci.2015.11.024

Seneda, M. M., Zangirolamo, A. F., Bergamo, L. Z., & Morotti, F. (2020). Follicular wave synchronization prior to ovum pick-up. Theriogenology, 150, 180–185. https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2020.01.024

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Surjus, R. S., Prata, A. B., Borsato, M., Mattos, F. C. S. Z., da Silveira, M. C. M., Mourão, G. B., Pires, A. v., Wiltbank, M. C., & Sartori, R. (2014). In vivo embryo production in cows superovulated 1 or 2 days after ovum pick-up. Reproduction, Fertility and Development, 26(4), 527–532. https://doi.org/10.1071/RD12398

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